本发明涉及一种可在乳酸乳球菌中分泌表达外源蛋白的食品级表达载体及其构建方法与应用,该载体包含有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。其构建方法为:用PCR方法扩增乳酸乳球菌Usp45蛋白的信号肽基因SPusp45,将其与食品级表达载体pNZ8149连接,连接产物用于转化大肠杆菌,筛选鉴定阳性转化菌,从中提取重组质粒,得到乳酸乳球菌分泌表达载体pNZ8149-SPusp45。本发明还公开了pNZ8149-SPusp45 作为外源蛋白表达载体的应用,包括以pNZ8149-SPusp45为载体构建的分泌表达幽门螺杆菌UreB蛋白的重组乳酸乳球菌及其应用。